Johdanto PCR -koneisiin

PCR -kone , joka tunnetaan myös nimellä PCR -geenin monistuslaite, PCR -monistuslaite, polymeraasiketjureaktion nukleiinihappo -monistuslaite, on instrumentti, joka monistaa spesifistä DNA: ta käyttämällä PCR (polymeraasiketjureaktio) -tekniikkaa. PCR -konetta käytetään laajasti lääketieteellisissä ja biologisissa laboratorioissa, kuten sen määrittämiseksi, onko testirungon PCR -koneita käytetty laajasti lääketieteellisissä ja biologisissa laboratorioissa, esimerkiksi sen määrittämiseksi, onko testi -organismilla geneettinen sairausprofiili, tarttuvien sairauksien diagnosoimiseksi, geenien toistamiseksi ja vanhempien tunnistamiseksi. Mikä on PCR -kone?

Tässä on sisältöluettelo:

l PCR -koneen perusrakenne

l PCR -koneen työperiaate

l PCR -koneiden reaktiokinetiikka

PCR -koneen perusrakenne

PCR -kone koostuu yleensä kuumasta kannen osasta, lämpösyklin osasta, siirtoosasta, ohjausosasta ja virtalähdeosasta jne.

PCR -koneen toimintaperiaate

PCR-koneen toimintaperiaate on samanlainen kuin DNA: n luonnollinen replikaatioprosessi, jonka spesifisyys riippuu oligonukleotidialukkeista, jotka täydentävät kohdesekvenssin molemmille päille ja koostuu kolmesta perusreaktiovaiheesta: denaturointi-surkeaneen laajennus.

1. Templaatti -DNA: n denaturointi

Templaatti-DNA kuumennetaan noin 93 ° C: seen tietyn ajan dissosioida PCR-koneen muodostama kaksijuosteinen templaatti-DNA tai kaksijuosteinen DNA, jotta se olisi yksijuosteinen, jotta se voi sitoutua alukkeisiin valmistelussa seuraavalle reaktiokierrokselle.

2. Templaatti -DNA: n ja alukkeiden hehkutus (denaturointi)

Kun templaatti-DNA denaturoituu yksijuosteiseksi kuumentamalla, lämpötila lasketaan noin 55 ° C: seen ja alukkeet pariksi ja sidotaan templaatti-DNA: n yksijuosteiseen komplementaariseen sekvenssiin.

3. Alukkeiden laajennus

DNA-templaatti-primer -konjugaatti syntetisoidaan taqDNA-polymeraasin vaikutuksella, käyttämällä templaattina reaktiomateriaalia ja kohdesekvenssiä, joka syntetisoidaan uusi puolivalikoima toistoa, joka on komplementaarinen templaatti-DNA-juosteen pohjaparin periaatteen ja puolivälissä replikaation periaatteen mukaisesti.

Toistamalla denaturointi-nostamis- ja pidennysprosessin, voidaan saada enemmän 'puoliksi konservoituneita toistoketjuja ', ja näitä uusia ketjuja voidaan käyttää malleina seuraavalle syklille.

PCR-koneen koneessa kestää 2 ~ 4 minuuttia kunkin syklin täyttämiseen, ja niin edelleen jokaisessa syklissä tuotetusta DNA: sta voi tulla seuraavan syklin templaatti, ja jokainen sykli vahvistaa DNA-spesifisen alueen kopiomäärää kahden synteettisen alukkeen välillä 1-kertaisesti, ja PCR-koneen tuote vahvistaa nopeasti eksponentiaalisessa muodossa 2 ~ 30-sykliä (2 ~ 3 tuntia). 109-kertainen 25 ~ 30 kierroksen jälkeen (2 ~ 3 tuntia), ja käytännössä se voi yleensä saavuttaa 106 ~ 107-kertaisesti.

PCR -koneen reaktiokinetiikka

PCR -koneen kolme reaktiovaihetta toistetaan, mikä johtaa DNA -monistuksen määrän eksponentiaaliseen kasvuun. Reaktion lopullinen DNA -monistus voidaan laskea käyttämällä y = (1+x) n. Y edustaa monistetun DNA -fragmentin kopioiden lukumäärää, X edustaa keskimääräistä monistustehokkuutta monistusta kohti ja n edustaa syklien lukumäärää. Keskimääräisen monistustehokkuuden teoreettinen arvo on 100%, mutta todellisen reaktion varhaisessa vaiheessa kohdesekvenssi -DNA -fragmentin lisääntyminen on eksponentiaalista, ja PCR -konekonetuotteiden asteittaisen kertymisen myötä monistetun DNA -fragmentin ei enää lisää eksponentiaalisesti, vaan se asettaa lineaarisen kasvujakson tai paikallaan olevan koneiden keskimääräisen tehokkuuden. PCR -kone ei saavuta teoreettista arvoa.

{. Se on asetettu Wuxi Cityyn, Jiangsun provinssiin, Kiinaan. Joten odotamme innolla yhteistyötä kanssasi.